Análise do uso de Bacillus subtilis como hospedeiro para expressão de VHH anti-fosfolipase de Bothrops jararacussu
| Primeiro orientador dc.contributor.advisor1 | Mariúba, Luis André Morais | |
| Currículo Lattes do primeiro orientador dc.contributor.advisor1Lattes | http://lattes.cnpq.br/4784959431673419 | eng |
| Primeiro membro da banca dc.contributor.referee1 | Souza, Thayana Cruz de | |
| Segundo membro da banca dc.contributor.referee2 | Silva, Edson Pablo da | |
| Autor dc.creator | Souza, Caio Coutinho de | |
| Currículo Lattes do autor dc.creator.Lattes | https://lattes.cnpq.br/5202386176640563 | eng |
| Data de defesa/publicação dc.date.issued | 2022-09-23 | |
| Resumo / Abstract dc.description.abstract | The Variables Heavy-chain Homodimers (VHHs), also called camelid nanobodies, are unusual and unique IgG antibody fragments from animals of the camelid family, which achieve high antigen-binding affinity and specificity. Currently, they are potential agents for applications in the treatment or diagnosis of snakebites. Different hosts have already produced recombinant nanobodies, but there are still challenges in this production that need to be overcome. In order to overcome these problems, we explored the use of Bacillus subtilis for the expression of VHHs. In chapter I of this dissertation we present a review article that initially raised the main studies that justify the choice of B. subtilis in research and industries. We correlated the characteristics of this host linked to the various genetic engineering strategies to produce biomolecules efficiently and economically. Chapter II discusses the results resulting from the use of B. subtilis strain KO7 as a host to produce an anti-phospholipase VHH. The B. subtilis KO7 was transformed with plasmid pHEN1 and subsequent induction of protein expression was carried out, confirmation of expression was performed by the western-blot technique and protein functionality was evaluated via flow cytometry assay. The results showed that the transformation using the pHEN1 vector was efficient and the inductions using the IPTG inducer or lactose were satisfactory. The VHH protein was expressed in the soluble portion of the bacterial lysate with a molecular mass of approximately 11 kDa. There was a high recognition of anti-phospholipase VHH against the myotoxic proteins Bothropstoxin I (BthTX-I) and Bothropstoxin II (BthTX-I) from Bothrops jararacussu, confirming that B. subtilis KO7 is a potential host to produce soluble VHHs and with its functionality preserved for later clinical use. | eng |
| Resumo (português) dc.description.resumo | Os Homodímeros Variáveis de Cadeia Pesada (VHHs), também chamados de nanocorpos de camelídeos, são fragmentos de anticorpos IgG incomuns e exclusivos de animais da família camelidae, que atingem alta afinidade e especificidade de ligação ao antígeno. Atualmente são agentes potenciais para aplicações no tratamento ou diagnóstico em casos de acidentes ofídicos. Diferentes hospedeiros já produziram nanocorpos recombinantes, porém ainda há desafios nesta produção que precisam ser superados.Visando contornar estes problemas, exploramos o uso de Bacillus subtilis para a expressão de VHHs. No capítulo I desta dissertação apresentamos um artigo de revisão que inicialmente levantou os principais estudos que justificam a escolha de B. subtilis na pesquisa e nas indústrias. Correlacionamos às características deste hospedeiro atreladas às variadas estratégias de engenharia genética para produzir biomoléculas de forma eficiente e econômica. O capítulo II aborda os resultados decorrentes da utilização de B. subtilis cepa KO7 como hospedeiro para produzir um VHH anti-fosfolipase. O B. subtils KO7 foi transformado com o plasmídeo pHEN1 e foi feita a posterior indução da expressão da proteína, a confirmação da expressão foi realizada pela técnica de western-blot e a funcionalidade da proteína foi avalida via ensaio de citometria de fluxo. Os resultados demonstraram que a transformação utilizando o vetor pHEN1 foi eficiente e as induções utilizando o indutor IPTG ou a lactose foram satisfatórias. A proteína VHH foi expressa na porção solúvel do lisado bacteriano apresentando uma massa molecular de aproximadamente 11 KDa. Observou-se um alto reconhecimento do VHH anti-fosfolipase contra as proteínas miotóxicas Bothropstoxina I (BthTX-I) e Bothropstoxina II (BthTX-II) de Bothrops jararacussu, constatando que B. subtilis KO7 é um potencial hospederio para produzir VHHs solúveis e com sua funcionalidade preservada para posterior uso clínico. | eng |
| Agência de fomento / Financiador dc.description.sponsorship | CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico | eng |
| Formato dc.format | application/pdf | * |
| Referência (citação) dc.identifier.citation | SOUZA, Caio Coutinho de. Análise do uso de Bacillus subtilis como hospedeiro para expressão de VHH anti-fosfolipase de Bothrops jararacussu. 2022. 98 f. Dissertação (Mestrado em Biotecnologia) - Universidade Federal do Amazonas, Manaus (AM), 2022. | eng |
| Endereço permanente (URI) dc.identifier.uri | https://tede.ufam.edu.br/handle/tede/9229 | |
| Idioma dc.language | por | eng |
| Instituição / Editora dc.publisher | Universidade Federal do Amazonas | eng |
| País dc.publisher.country | Brasil | eng |
| Faculdade, Instituto ou Departamento dc.publisher.department | Instituto de Ciências Biológicas | eng |
| Sigla da instituição dc.publisher.initials | UFAM | eng |
| Programa de Pós-Graduação dc.publisher.program | Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia | eng |
| Tipo de acesso dc.rights | Acesso Aberto | |
| Palavras-chave dc.subject | Bacillus subtilis KO7 | por |
| Palavras-chave dc.subject | Vetor fagomídeo | por |
| Palavras-chave dc.subject | VHH | por |
| Palavras-chave dc.subject | Bothrops jararacussu | por |
| Palavras-chave dc.subject | Fosfolipase | por |
| Palavras-chave dc.subject | Proteínas recombinantes | por |
| Área de conhecimento (CNPq) dc.subject.cnpq | CIENCIAS BIOLOGICAS | eng |
| Termo controlado dc.subject.other | Bothrops | por |
| Termo controlado dc.subject.other | Proteínas recombinantes | por |
| Termo controlado dc.subject.other | Bactérias | por |
| Termo controlado dc.subject.other | Cobras venenosas | por |
| Miniatura (endereço) dc.thumbnail.url | https://tede.ufam.edu.br/retrieve/61758/Disserta%c3%a7%c3%a3o_CaioSouza_PPGBIOTEC.pdf.jpg | * |
| Título dc.title | Análise do uso de Bacillus subtilis como hospedeiro para expressão de VHH anti-fosfolipase de Bothrops jararacussu | eng |
| Tipo de documento dc.type | Dissertação | eng |
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