Produção de biossurfactantes por bactérias isoladas de isópteros (cupins) coletados na Floresta Amazônica
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O propósito deste trabalho é investigar a produção de biossurfactates por bactérias associadas a espécie de cupim Nasutitermites sp. Serão testadas 18 linhagens bactérias associadas a espécie de cupim Nasutitermites sp que se encontram depositadas na coleção de culturas do Laboratório de Microbiologia do ISB/UFAM e que foram isoladas pela Dra Adriana Dantas. Cada linhagem será incubada em meio GYP (glicose 20g/L, extrato de levedura 5g/L; peptona 10 g/L; ágar 20 g/L) por 72 horas. Após isso, serão suspensas em água destilada, com densidade óptica igual a 2 (610 nm) que será a fonte de inóculo.A produção de biossurfactante será feita na presença de óleo diesel a 10% v/v + 50 mL de meio de cultura constituído de Mg SO4. 7H2O 0,5 g/L, KH2PO4 1 g/L, NaNO3 3 g/L, extrato de 17 levedura 1 g/L e peptona 0,3 g/L, com pH ajustado em 5,0
A produção de biossurfactantes será avaliada através da atividade de emulsificação do tipo A/O (água em óleo) e O/A (óleo em água). Para tanto, foi transferido para um tubo 3,5 mL do caldo de cultura livre de células e adicionado 2 mL do hidrocarboneto tolueno. Em outro tubo, adicionaram-se 2 mL de óleo diesel a 3,5 mL do caldo de cultura. Foi feita a medida da densidade óptica a 610 nm em espectrofotômetro a fim de se obter o valor do branco. Em seguida, cada tubo foi agitado vigorosamente em agitador de tubos (vortex) por 1 minuto. Após repouso de 1h seguiu-se novamente a medida de densidade óptica a 610 nm. A atividade de emulsificação do tipo óleo em água foi, então, determinada por At emul= Abst1h Abst0. Após 24 horas, a altura da emulsão água em óleo foi medida e expressa em centímetros.
A quantificação do efeito dos biossurfactantes sobre a tensão superficial será feita através de tensiômetro Krüss pelo método do anel de Du Nouy e a atividad emulsificante será avaliada através da atividade de emulsificação do tipo A/O (água em óleo) e O/A (óleo em água). As duas melhores linhagens serão identificadas através do sequenciamento do gene do rRNA 16s.
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